Первичное окрашивание: «Первичное и вторичное окрашивание волос» — Интернет-магазин Я маэстро

Содержание

Первичное окрашивание волос

Содержание

Введение………………………………………………………..4

1 Технологическая часть……………………………………..6

1.1 Последовательность выполнения первичной окраски

волос красителем 2 группы…………………………………………6

Дефекты, встречающиеся в работе………………………..9
Оборудование, инструменты, приспособления…………10
Материалы необходимые для окраски………………….. 11

2 Организация рабочего места ………………………………12

2.1 Перед началом работы……………………………………..12

2.2 Во время выполнения работы……………………………..12

3 по окончанию работы………………………………………13

3 Безопасные условия труда ………………………………..15

3.1 При выполнении стрижки волос………………………….15

3.2 При выполнении окраски волос…………………………..15

3.3 При выполнении химической завивки волос…………….15

Используемая литература

Введения

История окрашивания волос имеет очень древние корни. Доподлинно известно, что в Ассирии и Персии волосы и бороду окрашивали только богатые и знатные. Чуть позднее римляне переняли эту привычку у своих восточных соседей, причем особенно популярным считался почти обесцвеченный оттенок волос. До нас дошли рецепты окраски волос в трудах известного римского врача Галена. Интересно, что седину, согласно этим рецептам, рекомендовалось закрашивать при помощи отвара грецкого ореха.

Сколько ни воевали римляне с варварами, а все-таки северные белокурые женщины являлись для римлянок эталоном красоты!

А вот средневековье не донесло до нас никаких упоминаний о попытках женщин изменить себя, окрашивая волосы. Это и понятно, так как в те времена царили жестокие нравы и торжествовали своеобразные представления о женской целомудренности. Во времена Возрождения ожили старинные рецепты, а женщины снова могли пользоваться природными средствами для ухода за собой. Блондинки переживали очередной период популярности.

Расцвет алхимии наложил отпечаток и на особенности женской косметики. Так, в книге известного алхимика Джованни Маринелли рецепты косметических препаратов исполнены такого мистицизма, что ни одна современная женщина не осмелилась бы и пальцем прикоснуться к раствору, приготовленному в соответствии с его указаниями.

Позже, когда в моду вошел рыжий цвет, пальму первенства по окрашиванию волос переняли женщины легкого поведения. Очень популярна была хна — высушенные листья и кора кустарника лавсонии. С помощью хны можно получить оттенки от морковного до медного. Добавляя в хну индиго, грецкий орех или ромашку, получали различные оттенки. Из листьев кустарника индигоферы получали басму. Бесспорно, в те времена порядочные женщины уже не могли так ярко окрашивать собственные волосы, и мода постепенно изменялась.

Девятнадцатый век можно по праву назвать революционным, в том числе и в производстве косметики. Именно тогда были заложены основы современного производства краски для волос.

В 1907 году французский химик Эжен Шуэллер изобрел краситель с содержанием солей меди, железа и сульфата натрия. Новое патентованное средство гарантировало покупателю желаемый цвет. Чтобы выпускать свою краску, Шуэллер создал «Французское общество безопасных красителей для волос».

А через несколько лет оно превратилось в фирму «Л’ Ореаль», косметические товары которой хорошо известны.

Краски, содержащие соли металлов, использовались почти до середины нашего века.

В настоящее время такие краски применяются редко, хотя современные исследования показали, что через волосы и кожу головы тяжелые металлы практически не впитываются. Эти краски состоят из двух растворов: раствора солей металлов (серебра, меди, кобальта, железа) и раствора восстановителя. При окрашивании красками на основе солей можно получить, устойчивый цвет, но тон получается очень резким, неестественным. И еще — с их помощью можно получить только темные тона.

Современные фирмы-производители предлагают широкий выбор красящих средств: стойкие краски, оттеночные шампуни и бальзамы, средства для тонирования волос.

Технологическая часть

Последовательность выполнения первичной окраски волос красителем 2 группы

Красители второй группы — это химические (окислительные) красители, которые также применяются с окислителями, дают прочную окраску, так как вступают в реакцию с пигментом волос, частично его разрушают и окрашивают волосы.

Химические краски могут полностью изменить цвет волос, даже если эти волосы совсем седые. В процессе окрашивания поверхность волоса становится открытой и естественные пигменты удаляются в зависимости от природного цвета в большей или меньшей степени. Туда, где находились пигменты, проникают частички краски. Закрепляясь глубоко в волосе, они уже не смываются водой.

Химические красители бывают жидкие, желеобразные и кремообразные. Их растворяют с помощью окислителя.

При выборе краски очень важно принимать во внимание естественный цвет волос. Глухой коричневый цвет можно превратить в сияющий каштановый, тусклым светлым волосам придать новый блеск.

Выбор способа обработки волос, препаратов, их концентрации, температурного режима зависит от структуры волос и состояния кожи головы. Поэтому, прежде чем приступать к окраске, необходимо оценить состояние волос и кожного покрова головы. Также важно помнить, что окраска волос должна производиться препаратами, которые максимально щадят волосы.

Если у клиента есть склонность к аллергии, желательно провести тест на восприимчивость к данному виду красителя. Для этого небольшое количество препарата наносится на сухую кожу за ухом.

Если через 24 ч кожа краснеет и на ней появляется раздражение, то в данном случае лучше этим препаратом не пользоваться. Если на коже головы имеются раны или признаки кожных заболеваний, от окраски следует отказаться, чтобы не ухудшить состояние здоровья клиента.

Перед окраской голову не моют, чтобы сохранить жировую прослойку, предохраняющую волосы и кожу головы. Чтобы удалить с волос остатки

лака, мусса или других продуктов ухода, лучше всего перед окраской счесать

их с волос волосяной щеткой. Если все же голова будет излишне загрязнена, можно вымыть ее один раз, стараясь не затрагивать кожу.

Одежда клиента должна быть надежно защищена. Кожу по краевой линии роста волос можно смазать защитным кремом — это предохранит ее от раздражения и от окрашивания красителем.

Мастер должен работать в перчатках для защиты кожи рук. Все инструменты и принадлежности не должны иметь металлических частей, так как при взаимодействии красителя с металлом появляются нежелательные металлические соединения, отрицательно действующие на волосы и на качество красителя.

При определении цвета волос клиента используют шкалу натуральных оттенков. При этом прядь волос следует приподнять и осмотреть на просвет, так как в общей массе волосы кажутся несколько темнее. Количество седых волос учитывается в процентах относительно всей массы волос.

Для приготовления окрашивающей смеси используется специальная пластмассовая мисочка или шейкер. При составлении сложной смеси из нескольких красок необходимо очень тщательно перемешать все компоненты до однородной массы. Смешивать краску следует перед самым ее нанесением, так как процесс окисления начинается сразу же при смешивании и через некоторое время интенсивность цвета ослабевает.

Перед нанесением красителя волосы следует разделить двумя перпендикулярными проборами через макушку на четыре части. Сначала наносится краситель по проборам, а затем на затылочную зону, так как она более холодная и процесс там протекает менее интенсивно. При седых волосах краску следует наносить в первую очередь на места с наибольшим процентом седины. Краситель необходимо наносить быстро и точно, чтобы интенсивность цвета по всей массе волос получилась равномерной. Необходимо сделать это за 10—15 мин. Пряди должны быть настолько тонкими, чтобы краска могла пропитать их (чем толще волосы, тем тоньше прядь). Следует помнить, что краской должен хорошо пропитаться каждый волос.

Существует понятие первичной и вторичной окраски. Первичная окраска — это окраска неокрашенных ранее волос. Вторичная окраска — это окраска отросшей части волос. При первичной окраске краситель наносится, отступая от корня на расстояние 2 —4 см в зависимости от длины волос. Это связано с тем, что у корней волосы быстрее прокрашиваются. При вторичной окраске следует очень точно наносить краситель на отросшую часть пряди — ранее окрашенные волосы не должны вновь подвергаться воздействию препарата.

Особой осторожности требует окраска волос, подвергшихся химической завивке. Они более пористые и поэтому очень быстро усваивают краситель.

Окрашивать их следует через неделю после завивки, а процесс окрашивания сократить на 5—10 мин.

Очень важно соблюдать время выдержки. Его отсчет начинается после полного нанесения красителя. Время выдержки и использование дополнительного тепла зависит от фирмы-производителя красителя. После нанесения красителя на голове не должен образоваться «панцирь» из краски, способный создать парниковый эффект и затруднить выход свободного кислорода. Поэтому после нанесения красителя рекомендуется взрыхлить волосы. При попадании красителя в глаза их следует очень тщательно промыть водой.

Перед смыванием красителя с волос необходимо произвести контроль, чтобы убедиться в однородности цвета корней волос и концов. Для этого нужно сдвинуть обушком расчески краску с корневой части, затем с концов и сравнить их. Так же производится контроль за участками седых волос, и если обнаружится, что седина еще не прокрасилась, время выдержки красителя следует увеличить. За 5 мин до окончания времени выдержки рекомендуется осторожно прочесать волосы для выравнивания цвета.

По достижении желаемого цвета проводится эмульгирование: небольшое количество теплой воды наносится на волосы, слегка вспенивается и распределяется по всей длине волос, при этом производятся массирующие движения по краевой линии роста волос. Это дает возможность без труда удалить краситель с кожи головы и придать волосам блеск.

После этого волосы следует тщательно промыть водой, затем специальным шампунем и обработать нейтрализующим бальзамом, чтобы прекратить влияние остатков красителя во избежание вялотекущего процесса окисления после окраски, осветления или обесцвечивания волос. Существуют специальные шампуни, удаляющие все остаточные элементы химической реакции и нормализующие состояние кожи головы.

После окраски нужно обязательно дать клиенту рекомендации по правильному уходу за окрашенными волосами, иначе краска может быстро смыться и поблекнуть, и клиент ошибочно припишет это плохой работе парикмахера или низкому качеству красителя.

1.2 Дефекты, встречающиеся в работе

№	Наименование дефекта	Причина возникновения	Способ устранения
1	2	3	4
1	Получился цвет темнее	Выбран слишком темный тон красителя	делают декапаж, а корни потом можно этой же краской на 3% окислителя покрасить.
2	Получился тон светлее	Выбран слишком светлый тон красителя	Перекрасить в желаемый тон
3	Не получился желаемый эффект	Окислитель слабой концентрации	Можно подержать больше времени, чем положено или перекрасить той же краской
4	Волосы не везде окрасились в нужный тон	Недостаточная продолжительность выдержки	Перекрасить
5	Тон получился светлее	Неправильное соотношение красителя и окислителя	Перекрасить
6	Седина не закрасилась	Не произведена предварительная пигментация волос	Перекрасить
7	Пятна на волосах	Плохо размешан микстон	Промыть волосы не сколько раз, если не смылось перекрасить
8	получится эффект «горящих корней»	При первичном окрашивании в более светлый тон краситель нанесли не отступая от корней волос	использованием цвета на один тон темнее желаемого.

1.3 Оборудование, инструменты, приспособления

№	Наименование операции	Рекомендуемое оборудование
1	2	3
1	Расчесать волосы	Расческа с широкими зубьями
2	Тест на восприятия волос к данному красителю	Кисточка, мисочка
3	Защитить одежду клиента	пеньюар
4	Приготовить смесь	Мисочка, кисточка(для размешивания),краситель и окислитель 1:1
5	Разделить волосы на зоны	Расческа хвостик
7	Смазать коревую линию волос жирным кремом	Жирный крем
8	Нанести смесь на волосы	Мисочка, расческа, кисточка,
11	Время выдержки	таймер
13	Тщательно промыть волосы	Шампунь, приорат
14	Высушить волосы	Фен, расческа

Базовые техники окрашивания — презентация онлайн

World of
Базовые техники
Colour окрашивания

2.

3. Первичное окрашивание

4. Первичное окрашивание

5. Первичное окрашивание

6.

7. Первичное окрашивание

8. Первичное окрашивание

9. Первичное окрашивание

10. Первичное окрашивание

11. Первичное окрашивание

12. Первичное окрашивание

13. Вторичное окрашивание

14. Вторичное окрашивание

15. Вторичное окрашивание

16. Вторичное окрашивание

17. Вторичное окрашивание

18. Вторичное окрашивание

19.

20. Вторичное окрашивание

21. Вторичное окрашивание

22. Вторичное окрашивание

23. Классическое мелирование

24.

25. Классическое мелирование

26. Классическое мелирование

27. Классическое мелирование

28. Классическое мелирование

29. Классическое мелирование

30.

31. Классическое мелирование

32. Классическое мелирование

33. Классическое мелирование

34. Классическое мелирование

35. Классическое мелирование

36. Классическое мелирование

37. Классическое мелирование

38. Частичное мелирование

39. Частичное мелирование

40. Частичное мелирование

41.

42. Частичное мелирование

43. Частичное мелирование

44. Частичное мелирование

45. Частичное мелирование

46. Частичное мелирование

47.

48. Частичное мелирование

49. Секторное окрашивание

50. Секторное окрашивание

51. Секторное окрашивание

52. Секторное окрашивание

53. Секторное окрашивание

54. Секторное окрашивание

55. Секторное окрашивание

56. Секторное окрашивание

57. Прикорневое частичное мелирование и тонирование

58. Прикорневое частичное мелирование и тонирование

59. Прикорневое частичное мелирование и тонирование

60. Прикорневое частичное мелирование и тонирование

61. Прикорневое частичное мелирование и тонирование

62. Прикорневое частичное мелирование и тонирование

63. Прикорневое частичное мелирование и тонирование

64. Прикорневое частичное мелирование и тонирование

65. Прикорневое частичное мелирование и тонирование

66. Прикорневое частичное мелирование и тонирование

67. Прикорневое частичное мелирование и тонирование

— StatPearls — NCBI Bookshelf

Введение

Окрашивание по Граму — один из наиболее важных методов окрашивания в микробиологии. Он получил свое название от датского бактериолога Ганса Христиана Грама, который впервые представил его в 1882 году, в основном для выявления организмов, вызывающих пневмонию. Часто первый выполняемый тест, окрашивание по Граму, включает использование кристаллического фиолетового или метиленового синего в качестве основного цвета. Термином для организмов, которые сохраняют основной цвет и кажутся пурпурно-коричневыми под микроскопом, являются грамположительные организмы. Микроорганизмы, которые не поддаются первичной окраске, кажутся красными под микроскопом и являются грамотрицательными микроорганизмами.

Первым этапом окрашивания по Граму является использование кристаллического фиолетового красителя для первоначального окрашивания предметного стекла. Следующий шаг, также известный как фиксация красителя, включает использование йода для образования комплекса кристаллический фиолетовый-йод, чтобы предотвратить легкое удаление красителя. Впоследствии для удаления красителя используется обесцвечиватель, часто растворитель этанола и ацетона. Основной принцип окрашивания по Граму заключается в способности стенки бактериальной клетки удерживать краситель кристаллический фиолетовый во время обработки растворителем.[3] Грамположительные микроорганизмы имеют более высокое содержание пептидогликана, тогда как грамотрицательные организмы имеют более высокое содержание липидов.[4]

Изначально все бактерии поглощают краситель кристаллический фиолетовый; однако при использовании растворителя липидный слой грамотрицательных организмов растворяется. При растворении липидного слоя грамотрицательные теряют первичную окраску. Напротив, растворитель обезвоживает стенки грамположительных клеток с закрытием пор, предотвращая диффузию комплекса фиолетового с йодом, и, таким образом, бактерии остаются окрашенными. Продолжительность обесцвечивания является критическим этапом окрашивания по Граму, поскольку длительное воздействие обесцвечивающего агента может удалить все пятна от обоих типов бактерий.

Последним этапом окрашивания по Граму является окрашивание основным фуксином для придания обесцвеченным грамотрицательным бактериям розового цвета для облегчения идентификации. Он также известен как контрастное окрашивание. Некоторые лаборатории используют сафранин в качестве контрастного красителя; однако основной фуксин окрашивает грамотрицательные микроорганизмы более интенсивно, чем сафранин. Точно так же Hemophilus spp., Legionella app и некоторые анаэробные бактерии плохо окрашиваются сафранином.

Сбор образцов

Для окрашивания по Граму можно использовать различные клинические образцы. Некоторыми из обычно используемых образцов являются мокрота, кровь, спинномозговая жидкость, асцитическая жидкость, синовиальная жидкость, плевральная жидкость, моча и т. д. Также можно использовать мазки из ноздрей, горла, прямой кишки, раны, шейки матки и т. д. Сбор образцов всегда должен осуществляться в стерильных контейнерах.

Процедуры

Типы оборудования, необходимого для окрашивания по Граму, включают:

Реагенты, необходимые для окрашивания по Граму, включают:

Кристаллический фиолетовый (основной краситель) [1]
Раствор йода по Граму (протрава) [1]
Ацетон/этанол (50:50 об.:об.) (обесцвечиватель) 0[1] 0[1]
0,1% раствор основного фуксина (контрастное окрашивание) [1]
Вода

Процедура

1. Приготовление мазка:

Петля для посева используется для переноса капли взвешенной культуры на предметное стекло микроскопа.
Если в чашке Петри или в наклонной культуральной пробирке есть колония, добавляется капля или несколько петлей воды, чтобы облегчить перенос минимального количества колонии на предметное стекло.
Требуется минимальное количество культуры. Если культуру можно обнаружить визуально на инокуляционной петле, это указывает на сбор слишком большого количества культуры.
Культуру наносят с помощью инокуляционной петли до получения ровной тонкой пленки по кругу диаметром 15 мм. Типичное предметное стекло может содержать до 4 небольших мазков при исследовании более чем одной культуры.
Предметное стекло может быть высушено на воздухе или высушено с помощью тепла над нежным пламенем. Предметное стекло следует перемещать по кругу над пламенем, чтобы предотвратить перегрев или образование кольцевых узоров на предметном стекле. Тепло способствует адгезии клеток к предметному стеклу и предотвращает значительную потерю культуры во время промывания.

2. Окраска по Граму:

Краситель кристаллический фиолетовый добавляется поверх фиксированной культуры.
Через 10–60 секунд краситель смывается, а излишки красителя смываются водой. Цель состоит в том, чтобы смыть пятно без потери фиксированной культуры.
Раствор йода покрывает мазок на 10–60 секунд. Этот шаг известен как «фиксация красителя». Раствор йода сливают, предметное стекло промывают проточной водой. Избыток воды с поверхности стряхивается.[7]
На предметное стекло добавлено несколько капель обесцвечивающего средства. Обесцвечиватели часто представляют собой смешанный растворитель этанола и ацетона. Этот этап известен как «обработка растворителем». Предметное стекло промывают водой в течение 5 секунд. Чтобы предотвратить чрезмерное обесцвечивание грамположительных клеток, прекратите добавлять обесцвечивающий агент, как только растворитель перестанет окрашиваться при протекании по предметному стеклу.
Мазок докрашивают основным раствором фуксина в течение 40–60 секунд. Раствор фуксина смывают водой, а избыток воды промокают салфеткой. Слайд также можно высушить на воздухе после стряхивания лишней воды.

3. Микроскопия предметного стекла:

Предметное стекло следует исследовать под микроскопом в иммерсионном режиме.
При первоначальном исследовании слайдов следует использовать объектив X40 для оценки распределения мазка, а затем их следует исследовать с помощью масляного иммерсионного объектива X100.
Все участки предметного стекла требуют первоначального осмотра. Области толщиной всего в одну клетку должны быть исследованы. Толстые области на слайдах часто дают переменные и неправильные результаты.
Окрашивание лейкоцитов и макрофагов Грамотрицательные.
Клетки плоского эпителия окрашиваются грамположительно.

Используются различные модификации окрашивания по Граму, такие как окрашивание по Граму Аткина, окрашивание по Граму Берка и т. д.

Показания

Окрашивание по Граму показано при подозрении на бактериальную инфекцию для легкой и ранней диагностики.

Возможный диагноз

Окрашивание по Граму помогает в диагностике заболевания или патологического состояния.

Примеры грамположительных микроорганизмов:

Cocci: Staphylococcus species, and Streptococcus species
Bacilli: Corynebacterium species, Clostridium species, and Listeria species
Examples of gram-negative organisms are [9 ]:
Кокки: Neisseria gonorrheae, Neisseria meningitidis, и Moraxella species
Bacilli: Escherichia coil, Pseudomonas species, Proteus species, and Klebsiella species
Examples of gram variable organisms include:
Actinomyces species

Normal и Критические выводы

Нормальным признаком в стерильной жидкости организма должно быть отсутствие каких-либо патологических организмов в мазке. Организмы идентифицируются по цвету и форме. Грамположительные микроорганизмы имеют пурпурную или синюю окраску, а грамотрицательные — розовую или красную. Бациллы имеют палочковидную форму, а кокки – сферическую.

Выводы при окрашивании по Граму, указывающие на лежащую в основе бактериальную инфекцию:

Грамположительные кокки в скоплениях: обычно характерны для видов Staphylococcus , таких как S. aureus.
Грамположительные кокки в цепочках: Обычно характерны для Streptococcus видов, таких как S. pneumoniae, стрептококки группы B
Грамположительные кокки в виде тетрад:0011 Micrococcus spp.
Грамположительные бациллы, густые: обычно характерны для Clostridium spp., например C. perfringes , C. septicum .
Грамположительные палочки, тонкие: обычно характерны для Listeria spp.
Грамположительные палочки разветвленные: обычно характерны для Actinomyces и Nocardia .
Грамотрицательные диплококки: обычно характерны для Neisseria spp., например N.meningitidis .

(Please note: Moraxella spp., and Acinetobacter spp., are often diplococcal in morphology. Acinetobacter can sometimes appear as Gram-positive cocci, and they can be pleomorphic.

Coccobacilli : обычно характерны для Acinetobacter spp., и они могут быть грамположительными, грамотрицательными или грамвариабельными
Грамотрицательные палочки, тонкие: обычно характерны для Enterobacteriaceae , например E. coli .
Коккобациллы: обычно характерны для Hemophilus spp., таких как H. influenzae .
Изогнутый: обычно характерен для Vibrio spp.,; Campylobacter spp., такие как V. cholerae и C. jejuni .
Форма тонкой иглы: обычно характерна для Fusobacterium spp.

Грамвариабельные организмы: эти организмы не группируются ни в грамположительные, ни в грамотрицательные организмы.

Мешающие факторы

Если образец нестерильный, образец может быть контаминирован несколькими микроорганизмами. Точно так же неправильный сбор образцов и предшествующее использование антибиотиков могут помешать росту микроорганизмов. Во время интерпретации окраски по Граму, как описано Всемирной организацией здравоохранения в 2003 г., необходимо выполнить следующие шаги:

1. Общий характер мазка требует анализа при малом увеличении (10X)

Фон предметного стекла, как правило, должен быть грамотрицательным или прозрачным bacillus бактерии
Мазок должен быть толщиной в одну клетку без наложения клеток

2. При малом увеличении следует отметить следующее:

Относительное количество полиморфноядерных нейтрофилов (ПЯН), мононуклеаров и эритроцитов
Относительное количество клеток плоского эпителия и бактерий нормальной микробиоты

3. Иммерсионное обследование нескольких месторождений необходимо учитывать следующее:

Микроорганизмы: если идентифицированы, укажите номера и морфологию и уплощенная
Внешний вид сторон: параллельные, яйцевидные, неправильные или вогнутые
Ось тела: прямая, изогнутая или спиральная
Плеоморфизм (вариация формы)
Ветвление или удлинение клеток

Осложнения

Интерпретация препаратов может быть затруднена, если микроскопический мазок толстый и слипшийся. Время обесцвечивания следует очень тщательно контролировать, чтобы избежать недостаточного или чрезмерного обесцвечивания. Более толстые мазки требуют более длительного времени обесцвечивания. Точно так же культуры должны подвергаться оценке, пока они еще свежие. Старые культуры, как правило, теряют пептидогликановые клеточные стенки, что предрасполагает грамположительные клетки к грамотрицательным или грамвариабельным. Окрашивание по Граму бесполезно для организмов без клеточной стенки, таких как Mycoplasma видов, а также для более мелких бактерий, таких как Chlamydia и Rickettsia видов.

Окрашивание по Граму не может ложно выявить микроорганизмы в следующем сценарии:

Применение антибиотиков перед взятием образца
Несоответствующий возраст культуры: слишком молодой или слишком старый
Фиксация мазка до его высыхания
Мазок слишком густой0031
Low concentration of crystal violet
Excessive heat fixation
Excessive washing between steps
Insufficient exposure to iodine
Prolonged decolorization
Excessive counterstaining
Lack of experience in подготовка предметного стекла и просмотр предметного стекла

Иногда результаты окрашивания по Граму могут не совпадать с окончательными результатами посева и потенциально могут привести к ненадлежащему использованию антибиотиков. [10]

Клиническое значение

Окрашивание по Граму часто является начальным диагностическим тестом для оценки инфекций. Использование окраски по Граму облегчает быстрое применение соответствующих антибиотиков. Однако генетические последовательности и молекулярные методы более специфичны, чем классическое окрашивание по Граму.

Контрольные вопросы

Доступ к бесплатным вопросам с несколькими вариантами ответов по этой теме.
Комментарий к этой статье.

Ссылки

1.: БАРТОЛОМЬЮ Дж. В., МИТТВЕР Т. Окрашивание по Граму. Bacteriol Rev. 1952 Mar; 16(1):1-29. [Бесплатная статья PMC: PMC180726] [PubMed: 14925025]
2.: O’Toole GA. Классический обзор: как работает окраска по Граму. J Бактериол. 2016 01 декабря;198(23):3128. [Бесплатная статья PMC: PMC5105892] [PubMed: 27815540]
3.: LIBENSON L, McILROY AP. О механизме окрашивания по Граму. J заразить дис. 1955 г., июль-август; 97 (1): 22–6. [В паблике: 13242849]
4.: ШУГАР Д., БАРАНОВСКАЯ Ю. Исследования по окрашиванию по Граму; Значение белков в реакции Грама. Acta Microbiol Pol (1952). 1954;3(1):11-20. [PubMed: 13147751]
5.: HASLETT AS. Химическое значение теста Грама для бактерий. Aust J Sci. 1947 21 июня; 9 (6): 211. [PubMed: 20255991]
6.: Попеску А., Дойл Р.Дж. Окраска по Граму спустя более века. Биотехнологический гистохим. 1996 мая; 71(3):145-51. [PubMed: 8724440]
7.: MITTWER T, BARTHOLOMEW JW, KALLMAN BJ. Механизм реакции Грама. II. Функция йода в окраске по Граму. Технология окрашивания. 1950 окт; 25 (4): 169-79. [PubMed: 14782050]
8.: Уилсон МЛ. Клинически значимая, рентабельная клиническая микробиология. Стратегии сокращения ненужного тестирования. Ам Джей Клин Патол. 1997 г., февраль; 107 (2): 154–67. [PubMed:64]
9.: Беверидж Т.Дж., Дэвис Дж.А. Клеточные реакции Bacillus subtilis и Escherichia coli на окраску по Граму. J Бактериол. 1983 г., ноябрь; 156 (2): 846-58. [Статья бесплатно PMC: PMC217903] [PubMed: 6195148]
10.: Rand KH, Tillan M. Ошибки в интерпретации окрашивания по Граму из положительных культур крови. Ам Джей Клин Патол. 2006 ноябрь; 126 (5): 686-90. [PubMed: 17050065]

грамм — StatPearls — NCBI Bookshelf

Введение

Окрашивание по Граму является одним из наиболее важных методов окрашивания в микробиологии. Он получил свое название от датского бактериолога Ганса Христиана Грама, который впервые представил его в 1882 году, в основном для выявления организмов, вызывающих пневмонию. Часто первый выполняемый тест, окрашивание по Граму, включает использование кристаллического фиолетового или метиленового синего в качестве основного цвета. Термином для организмов, которые сохраняют основной цвет и кажутся пурпурно-коричневыми под микроскопом, являются грамположительные организмы. Микроорганизмы, которые не поддаются первичной окраске, кажутся красными под микроскопом и являются грамотрицательными микроорганизмами.

Сбор образцов

Процедуры

Типы оборудования, необходимого для окрашивания по Граму, включают:

Реагенты, необходимые для окрашивания по Граму, включают:

Кристаллический фиолетовый (основной краситель) [1]
Раствор йода по Граму (протрава) [1]
Ацетон/этанол (50:50 об.:об.) (обесцвечиватель) 0[1] 0[1]
0,1% раствор основного фуксина (контрастное окрашивание) [1]
Вода

Процедура

1. Приготовление мазка:

Петля для посева используется для переноса капли взвешенной культуры на предметное стекло микроскопа.
Если в чашке Петри или в наклонной культуральной пробирке есть колония, добавляется капля или несколько петлей воды, чтобы облегчить перенос минимального количества колонии на предметное стекло.
Требуется минимальное количество культуры. Если культуру можно обнаружить визуально на инокуляционной петле, это указывает на сбор слишком большого количества культуры.
Культуру наносят с помощью инокуляционной петли до получения ровной тонкой пленки по кругу диаметром 15 мм. Типичное предметное стекло может содержать до 4 небольших мазков при исследовании более чем одной культуры.
Предметное стекло может быть высушено на воздухе или высушено с помощью тепла над нежным пламенем. Предметное стекло следует перемещать по кругу над пламенем, чтобы предотвратить перегрев или образование кольцевых узоров на предметном стекле. Тепло способствует адгезии клеток к предметному стеклу и предотвращает значительную потерю культуры во время промывания.

2. Окраска по Граму:

Краситель кристаллический фиолетовый добавляется поверх фиксированной культуры.
Через 10–60 секунд краситель смывается, а излишки красителя смываются водой. Цель состоит в том, чтобы смыть пятно без потери фиксированной культуры.
Раствор йода покрывает мазок на 10–60 секунд. Этот шаг известен как «фиксация красителя». Раствор йода сливают, предметное стекло промывают проточной водой. Избыток воды с поверхности стряхивается.[7]
На предметное стекло добавлено несколько капель обесцвечивающего средства. Обесцвечиватели часто представляют собой смешанный растворитель этанола и ацетона. Этот этап известен как «обработка растворителем». Предметное стекло промывают водой в течение 5 секунд. Чтобы предотвратить чрезмерное обесцвечивание грамположительных клеток, прекратите добавлять обесцвечивающий агент, как только растворитель перестанет окрашиваться при протекании по предметному стеклу.
Мазок докрашивают основным раствором фуксина в течение 40–60 секунд. Раствор фуксина смывают водой, а избыток воды промокают салфеткой. Слайд также можно высушить на воздухе после стряхивания лишней воды.

3. Микроскопия предметного стекла:

Предметное стекло следует исследовать под микроскопом в иммерсионном режиме.
При первоначальном исследовании слайдов следует использовать объектив X40 для оценки распределения мазка, а затем их следует исследовать с помощью масляного иммерсионного объектива X100.
Все участки предметного стекла требуют первоначального осмотра. Области толщиной всего в одну клетку должны быть исследованы. Толстые области на слайдах часто дают переменные и неправильные результаты.
Окрашивание лейкоцитов и макрофагов Грамотрицательные.
Клетки плоского эпителия окрашиваются грамположительно.

Показания

Окрашивание по Граму показано при подозрении на бактериальную инфекцию для легкой и ранней диагностики.

Возможный диагноз

Окрашивание по Граму помогает в диагностике заболевания или патологического состояния.

Примеры грамположительных микроорганизмов:

Cocci: Staphylococcus species, and Streptococcus species
Bacilli: Corynebacterium species, Clostridium species, and Listeria species
Examples of gram-negative organisms are [9 ]:
Кокки: Neisseria gonorrheae, Neisseria meningitidis, и Moraxella species
Bacilli: Escherichia coil, Pseudomonas species, Proteus species, and Klebsiella species
Examples of gram variable organisms include:
Actinomyces species

Normal и Критические выводы

Выводы при окрашивании по Граму, указывающие на лежащую в основе бактериальную инфекцию:

Грамположительные кокки в скоплениях: обычно характерны для видов Staphylococcus , таких как S. aureus.
Грамположительные кокки в цепочках: Обычно характерны для Streptococcus видов, таких как S. pneumoniae, стрептококки группы B
Грамположительные кокки в виде тетрад:0011 Micrococcus spp.
Грамположительные бациллы, густые: обычно характерны для Clostridium spp., например C. perfringes , C. septicum .
Грамположительные палочки, тонкие: обычно характерны для Listeria spp.
Грамположительные палочки разветвленные: обычно характерны для Actinomyces и Nocardia .
Грамотрицательные диплококки: обычно характерны для Neisseria spp., например N.meningitidis .

(Please note: Moraxella spp., and Acinetobacter spp., are often diplococcal in morphology. Acinetobacter can sometimes appear as Gram-positive cocci, and they can be pleomorphic.

Coccobacilli : обычно характерны для Acinetobacter spp., и они могут быть грамположительными, грамотрицательными или грамвариабельными
Грамотрицательные палочки, тонкие: обычно характерны для Enterobacteriaceae , например E. coli .
Коккобациллы: обычно характерны для Hemophilus spp., таких как H. influenzae .
Изогнутый: обычно характерен для Vibrio spp.,; Campylobacter spp., такие как V. cholerae и C. jejuni .
Форма тонкой иглы: обычно характерна для Fusobacterium spp.

Мешающие факторы

1. Общий характер мазка требует анализа при малом увеличении (10X)

Фон предметного стекла, как правило, должен быть грамотрицательным или прозрачным bacillus бактерии
Мазок должен быть толщиной в одну клетку без наложения клеток

2. При малом увеличении следует отметить следующее:

Относительное количество полиморфноядерных нейтрофилов (ПЯН), мононуклеаров и эритроцитов
Относительное количество клеток плоского эпителия и бактерий нормальной микробиоты

3. Иммерсионное обследование нескольких месторождений необходимо учитывать следующее:

Микроорганизмы: если идентифицированы, укажите номера и морфологию и уплощенная
Внешний вид сторон: параллельные, яйцевидные, неправильные или вогнутые
Ось тела: прямая, изогнутая или спиральная
Плеоморфизм (вариация формы)
Ветвление или удлинение клеток

Осложнения

Окрашивание по Граму не может ложно выявить микроорганизмы в следующем сценарии:

Применение антибиотиков перед взятием образца
Несоответствующий возраст культуры: слишком молодой или слишком старый
Фиксация мазка до его высыхания
Мазок слишком густой0031
Low concentration of crystal violet
Excessive heat fixation
Excessive washing between steps
Insufficient exposure to iodine
Prolonged decolorization
Excessive counterstaining
Lack of experience in подготовка предметного стекла и просмотр предметного стекла

Клиническое значение

Контрольные вопросы

Доступ к бесплатным вопросам с несколькими вариантами ответов по этой теме.
Комментарий к этой статье.

Ссылки

1.: БАРТОЛОМЬЮ Дж. В., МИТТВЕР Т. Окрашивание по Граму. Bacteriol Rev. 1952 Mar; 16(1):1-29. [Бесплатная статья PMC: PMC180726] [PubMed: 14925025]
2.: O’Toole GA. Классический обзор: как работает окраска по Граму. J Бактериол. 2016 01 декабря;198(23):3128. [Бесплатная статья PMC: PMC5105892] [PubMed: 27815540]
3.: LIBENSON L, McILROY AP. О механизме окрашивания по Граму. J заразить дис. 1955 г., июль-август; 97 (1): 22–6. [В паблике: 13242849]
4.: ШУГАР Д., БАРАНОВСКАЯ Ю. Исследования по окрашиванию по Граму; Значение белков в реакции Грама. Acta Microbiol Pol (1952). 1954;3(1):11-20. [PubMed: 13147751]
5.: HASLETT AS. Химическое значение теста Грама для бактерий. Aust J Sci. 1947 21 июня; 9 (6): 211. [PubMed: 20255991]
6.: Попеску А., Дойл Р.Дж. Окраска по Граму спустя более века. Биотехнологический гистохим. 1996 мая; 71(3):145-51. [PubMed: 8724440]
7.: MITTWER T, BARTHOLOMEW JW, KALLMAN BJ. Механизм реакции Грама. II. Функция йода в окраске по Граму. Технология окрашивания. 1950 окт; 25 (4): 169-79. [PubMed: 14782050]
8.: Уилсон МЛ. Клинически значимая, рентабельная клиническая микробиология. Стратегии сокращения ненужного тестирования. Ам Джей Клин Патол. 1997 г., февраль; 107 (2): 154–67. [PubMed:64]
9.