Виды окрашивания волос в NailsProfi

ВИДЫ ОКРАШИВАНИЯ ВОЛОС

Множество женщин по всему миру используют окрашивание волос для того, чтоб изменить имидж или подчеркнуть свою индивидуальность. Одни проводят окрашивание волос самостоятельно дома, другие же обращаются в салоны красоты к профессиональным стилистам. Если вы решили изменить свою внешность, рекомендуем начать из окрашивания волос в салоне «NailsProfi».

Мы используем только качественные краски фирм Lebel и Matrix.

Профессиональные средства для волос отличаются от масс-маркета тем, что они создаются исключительно из высококачественного сырья.

Краска Matrix не содержит аммиака, что позволяет свести к минимуму вредное влияние на волосы. При этом специальная формула состава способствует максимально глубокому проникновению красящего пигмента в чешуйки волос. А за счёт содержания керамидов на волосах образуется так называемая плёнка, которая придаёт объём волосам, делает их блестящими и шелковистыми.

Отличительная черта японской краски Lebel – это её натуральный состав с повышенным содержанием цветового пигмента. Она щадяще окрашивает даже самые тёмные волосы и даёт ровное покрытие по всей длине. Кроме того, природные компоненты краски ухаживают за локонами во время окрашивания, после чего они становятся более ровными по структуре.

ОСНОВНЫЕ ВИДЫ ОКРАШИВАНИЯ ВОЛОС

Классическое окрашивание – краска наносится равномерно, без использования специальных профессиональных приёмов. В результате волосы приобретают однотонный оттенок. Чаще всего такой метод используется для закрашивания седины или для придания натуральному цвету более насыщенного оттенка.

Мелирование – отдельные пряди окрашиваются на несколько тонов светлее, чем основной цвет.

Тонирование – техника окрашивания с помощью нестойких красок, таких как тоники, спреи и муссы фирмы Matrix. Этот вид окрашивания волос считается наиболее щадящим, так как сам краситель остается на поверхности волоса, не попадая внутрь и не разрушая его структуру. С помощью тонирования можно слегка придать натуральным волосам яркости и глубины цвета.

Колорирование – технически похоже на мелирование, отличие лишь в том, что пряди не осветляются, а окрашиваются в несколько оттенков.

Декапирование – или, так называемая, смывка. Это отличный способ для тех, кто любит менять свой образ, который позволяет избавиться от надоевшего оттенка волос.

Блондирование– процедура обесцвечивания волос краской Matrix с помощью специальной технологии, действующей на волосяной пигмент. Блондирование тёмных волос может иметь непредсказуемый эффект, поэтому рекомендуется проводить эту процедуру на светлых от природы локонах и под руководством опытного мастера.

Шатуш– при окрашивании тёмные и светлые пряди чередуются благодаря растушёвке краски, в результате получается эффект выгоревших локонов. Такая техника окрашивания подразумевает создание естественного ненавязчивого образа.

Какой бы вид окрашивания вы не выбрали, после любых манипуляций волосам необходим правильный уход и восстановление. В нашем салоне вы можете приобрести специальный шампунь и бальзам фирм Lebel и Matrix, они оказывают дополнительный уход волосам, усиливая эффект от окрашивания и ухаживая за волосами.

Однако восстановительные процедуры не стоит проводить чаще одного раза в неделю, чтобы не перегружать волосы. Если же вы до сих пор не можете определиться с выбором цвета волос, то наши мастера советуют вам просто освежить свой природный цвет. Всегда есть возможность поэкспериментировать с цветовой гаммой – и окрашивание волос на несколько тонов светлее или темнее натурального сделает их более насыщенными и ухоженными.

 

Какие типы окрашивания волос вышли из моды: фото, описание окрашивания

Каждый сезон мы слышим о новых трендах, которые распространяются на одежду, макияж или окрашивание волос. Поэтому то, что было актуально совсем недавно, переходит в раздел «антитрендов». Какие типы окрашивания волос в «чёрном списке», и их лучше не рассматривать — в нашей подборке.

Теги:

Мода

Волосы

Уход за волосами

Окрашивание волос

Омбре

Рассказывает Эльбек Пулатов, тренер Paul Mitchell.

Содержание статьи

Омбре

Резкий переход от темных корней к светлым кончикам попробовали, кажется, уже все, включая провинциальных школьниц. Несколько сезонов назад это, возможно, еще имело право на существование, но весной 2019 года смотрится странно. И грустно. Особенно на взрослых девушках. Более актуальная и безобидная альтернатива — так называемое «софт омбре» с мягким переходом оттенков от натуральных корней к чуть более светлым кончикам. Учтите, самостоятельно получить такой эффект практически невозможно. Не экспериментируйте.

Крупное мелирование

РЕКЛАМА – ПРОДОЛЖЕНИЕ НИЖЕ

Эффект «полосок на арбузе» до сих пор можно встретить в недрах метрополитена. И если кто-то думает, что такой прием освежает образ и придает дополнительный объем, этот кто-то сильно заблуждается.

Резкие контрасты сейчас вообще не особо актуальны. Вместо этого отдайте предпочтение современным техникам мелирования, где берутся мелкие пряди и создается очень красивый и естественный эффект солнечных бликов (или беби-лайтс). Само собой, осветляют прядки не более чем на 2−3 тона.

Однотонное окрашивание

Окрашивание в один тон можно сравнить с пресловутым черным платьем. Кажется, будто это классика, моде неподвластная. Но на практике меняются фасоны, отделка… То же самое и с волосами. Стандартное окрашивание в один цвет, каким бы он ни был, сейчас выглядит скучно и никак не выделяет свою обладательницу. Вариант более модный — добавить глубины в корнях, а длину оставить чуть более светлой. Такой прием идеально подойдет тонким волосам, так как визуально добавит им объема. Можно и на 1−2 тона высветлить несколько передних прядок, чтобы красиво обрамить овал лица и выигрышно подчеркнуть скулы.

«Седое» окрашивание

Некоторое время назад окрашивание «под седину» было на пике популярности. Но весной все-таки хочется больше цвета, поэтому отдайте предпочтение каким-то более насыщенным оттенкам. Если уж очень хочется «серого», сделайте окрашивание «металлик» в оттенках стали. Волосы предварительно придется осветлить, после чего затонировать в выбранный тон. Такой цвет сам по себе вымывается довольно быстро, поэтому держите под рукой фиолетовый шампунь.

Холодные оттенки блонда

С холодным блондом все сложно. Во‑первых, он очень капризный, так что хлопот будет немало. Сделать так, чтобы оттенок не уходил в желтизну или зелень, не так-то просто. Кроме того, многие сероватые тона требуют идеального цвета лица, а еще могут добавить возраст. В этом сезоне на подиумы наконец-то вернулся теплый блонд. И это действительно хорошая новость. Поддержать красивый пшеничный или медовый оттенок в первозданном виде значительно проще. Идут они практически всем и удачно сочетаются как с загорелой, так и с бледной кожей.

Горизонтальные яркие пряди

Сначала они были популярны лишь на подиуме, но вскоре перекочевали и на улицы. Сейчас, впрочем, контрастные пряди по периметру головы уходят в прошлое, и вряд ли кто-то об этом всерьез сожалеет. Такой прием, возможно, способен подчеркнуть креативную стрижку. Но если вы носите вполне классический боб, а тем более длинные волосы, просто забудьте о нем. Гораздо более удачная альтернатива — пряди вертикальные. Очень красиво смотрятся пастельные оттенки: нежно-розовые, салатовые, светло-голубые. Можно поэкспериментировать с неоновыми тонами.

Окрашивание натуральными красителями

Хну и басму многие до сих пор считают безвредной заменой «химическим» красителям. Вот это очень серьезная ошибка, которая может доставить вам массу неприятностей. Дело в том, что все натуральные красители накапливаются в волосе и могут вступить в реакцию с молекулами искусственного пигмента. Проще говоря, покрасить волосы краской или осветлить их после хны очень рискованно — результат непредсказуем. Если для вас важна натуральность красителя, используйте современные безаммиачные продукты. Сейчас их выбор очень широк, и для здоровья волос их безопасность доказана.

Источник

Окрашивание: определение и типы

Содержание

• Что такое окрашивание?
• Подготовка биологического образца
• Типы техники окрашивания
• Биологические красители

Что такое окрашивание?

Окрашивание в микробиологии можно определить как метод, который используется для улучшения и контрастирования биологического образца на микроскопическом уровне. Пятна и красители используются для выделения образца на микроскопическом уровне, чтобы изучить его при большем увеличении для гистопатологических исследований и диагностических целей.

Однако окрашивание не ограничивается только биологическими образцами, его также можно использовать для изучения структуры кристаллических полимеров.

Подготовка биологического образца

Подготовка биологического образца для анализа под микроскопом зависит от типа окрашивания. Ниже приведены некоторые процедуры, которые выполняются.

• Мокрое крепление: Живые биологические образцы монтируются на предметное стекло с водой и специальными красителями.
• Фиксация: Это многоэтапный процесс, направленный на сохранение формы клеток и тканей. Тепловая фиксация проводится для уничтожения и приклеивания образцов. Химическая фиксация проводится для создания прочных связей и повышения жесткости образцов. Обычными химическими фиксаторами являются формальдегид, пикриновая кислота, метанол и этанол.
• Морилка: Морилка – это химический реагент, который используется вместе с красителем, чтобы сделать образец окрашиваемым, который в противном случае не окрашивается. Морилки бывают двух видов:
• Основные протравы: реагируют с кислотными красителями.
• Кислотные протравы: реагируют с основными красителями.

Окрашивание с помощью протравы называется непрямым окрашиванием. С другой стороны, когда окрашивание производится без помощи протравы, оно называется прямым окрашиванием.

• Пермеабилизация: Эта процедура включает обработку образца поверхностно-активным веществом, растворяющим клеточную мембрану, что позволяет легко окрашивать красителем.

Типы техники окрашивания

1. Окрашивание по Граму: Эта процедура окрашивания используется для идентификации бактерий по составу их клеточной стенки. Существует два типа окрашивания по Граму, и бактерии можно разделить на грамположительные и грамотрицательные. Он использует кристаллический фиолетовый для окрашивания клеточных стенок, йод в качестве протравы и сафранин или фуксин в качестве контрастного красителя.
2. Окрашивание эндоспор: Этот метод используется для выявления наличия эндоспор у бактерий. Эндоспоры представляют собой жесткие спящие структуры, менее проницаемые для красителей и пятен. Их присутствие затрудняет уничтожение бактерий. Процесс включает в себя термофиксацию образца и окрашивание его смесью сафранина и 5% разбавленного малахитового зеленого.
3. Окрашивание по Цилю-Нильсену: Этот метод используется для окрашивания кислотоустойчивых бактерий, таких как Mycobacterium tuberculosis , которые не окрашиваются по Граму. Карбол-фуксин используется в качестве красителя, а метиленовый синий используется в качестве контрастного красителя.
4. Окрашивание гематоксилином и эозином: Эта процедура окрашивания используется в гистопатологических исследованиях для изучения тонких срезов тканей. Окраска гематоксилином окрашивает ядра в синий цвет, а цитоплазму и ее компоненты в красный или розовый цвет.
5. Окрашивание периодической кислотой-Шиффом (PAS): Окрашивание PAS используется для окрашивания молекул углеводов. Он используется в тканях печени, почек, поджелудочной железы и яичников для определения наличия гликогена и помощи в диагностике заболеваний.
6. Окрашивание по Массону: Трихром по Массону — это процедура трехцветного окрашивания, используемая для дифференциации клеток из соединительной ткани. Он окрашивает мышечные волокна и кератин в красный цвет, коллаген в сине-зеленый, цитоплазму в красно-розовый, а ядра в черный цвет.

Подробнее: Различие между простым и дифференциальным окрашиванием

Биологические красители

Некоторые из наиболее часто используемых биологических красителей перечислены ниже:

• Акридиновый оранжевый: Это флуоресцентный катионный краситель, селективный к нуклеиновым кислотам. Он используется во время клеточного цикла для анализа молекул ДНК.
• Кумасси синий: Используется в гель-электрофорезе для окрашивания белков в синий цвет.
• Кристаллический фиолетовый: Используется при окрашивании по Граму вместе с йодом для окрашивания клеточной стенки бактерий в пурпурный цвет.
• Эозин: Используется в качестве контрастного красителя гематоксилину, который придает красный цвет цитоплазме и ее компонентам.
• Бромид этидия: Придает ДНК красно-оранжевое флуоресцентное окрашивание после интеркалирования с молекулой.
• Йод: Используется в качестве протравы при окрашивании по Граму.
• Малахитовый зеленый: Дает сине-зеленый цвет при использовании в качестве контрастного красителя против сафранина, который используется при окрашивании эндоспор.
• Метиленовый синий: Используется для окрашивания клеток животных, так как усиливает ядра.
• Сафранин: Красный катионный краситель, используемый в качестве контрастного красителя как при окрашивании по Граму, так и при окрашивании эндоспор.

Подводя итог окрашиванию в целом. Подробнее читайте на сайте BYJU’S Biology.

Вас также может заинтересовать:

• Разница между грамположительными и грамотрицательными бактериями
• Какие бывают виды пятен?

Пятна — Центр ресурсов по микробиологии

Соображения безопасности

Будьте осторожны с аэрозолями при переносе бактерий из петли на предметное стекло. Петля очень гибкая, и ее легко отключить от петли, полной организмов. Не думайте, что ваш организм мертв. Фиксация тепла или метанола не гарантирует уничтожения организма. Выбрасывайте заполненные предметные стекла в ведро с дезинфицирующим средством на рабочем месте.

Общие соображения

Вы стремитесь получить легкую суспензию клеток, которая оставит на предметном стекле слабое мутное пятно. У вас много места на слайде; используй это! Сначала полезно нарисовать круг в нижней части слайда, чтобы вы знали, где искать мазок. Очень легко запутаться, на какой стороне слайда находится ваш мазок. Обязательно пометьте дальний край слайда. Делайте это постоянно на одном и том же конце слайда, чтобы сориентировать слайд.

Наберитесь терпения и дайте предметному стеклу высохнуть на воздухе, прежде чем приклеивать его к предметному стеклу. Если предметное стекло будет влажным и вы зафиксируете его нагреванием, бактерии закипят, и клеточная морфология будет потеряна. Если ваше предметное стекло мокрое и зафиксируйте его в метаноле, оно, скорее всего, смоется. Слишком толстые мазки, скорее всего, смоются с предметного стекла независимо от метода фиксации.

Мазок из бульона

С бульонными культурами обычно легче работать, поскольку клетки уже разведены в бульоне. Обязательно тщательно перемешайте культуральную пробирку, чтобы суспендировать бактерии в бульоне.

1. Назовите слайд. Асептически перенесите полную петлю организма в центр предметного стекла.
2. Используйте плоскую часть петли, чтобы размазать каплю бульона вокруг предметного стекла. Используйте спиралевидные круговые движения, чтобы распределить каплю. Поскольку бульон полон белка, мазок обычно остается расплывчатым и не образует комочков на поверхности предметного стекла.
3. Отложите предметное стекло для просушки на воздухе. Это займет как минимум несколько минут. Не торопитесь с этим шагом.

Мазок с чашки

Петлей можно удалить много микроорганизмов. Вы можете использовать иглу для прививки, чтобы перенести свой организм на предметное стекло.

Обязательно используйте стерильную воду для разбавления образцов. Обычная водопроводная вода или деионизированная вода в бутылках для ополаскивания часто заражены бактериями.

1. Назовите слайд. Асептически перенесите петлю со стерильной водой в центр предметного стекла.
   • Это служит как для разбавления ваших бактерий, так и для распространения.
2. Выберите хорошо изолированную колонию.
3. Проколоть стерильной иглой или слегка зачерпнуть край колонии стерильной петлей.
4. Поместите иглу/петлю в центр капли и круговыми движениями по спирали распределите бактерии по предметному стеклу.
5. Отложите предметное стекло для просушки на воздухе. Это займет как минимум несколько минут. Не торопитесь с этим шагом.

Фиксация

Процедура фиксации одинакова независимо от источника мазка, планшета или бульона. Существует два метода прикрепления бактерий к предметному стеклу: термофиксация или фиксация метанолом. Термофиксация используется только с организмами BSL1. Организмы, с которыми мы будем работать, относятся к BSL2, поэтому вам нужно будет использовать метод фиксации метанола. Тепловая фиксация предметного стекла может привести к образованию аэрозолей, и с организмами BSL2 мы должны максимально предотвратить это. Фиксация метанола вызывает меньше изменений в клеточной морфологии и не создает аэрозолей.

Пожалуйста, будьте осторожны при работе с метанолом, если вы забудете, что зафиксировали его метанолом, и ваше предметное стекло не полностью высохнет, оставшийся метанол загорится.

Фиксатор метанола (BSL2)

1. Убедитесь, что предметное стекло абсолютно сухое. Установите его на стойку для окрашивания над раковиной.
2. Осторожно залейте предметное стекло 95% метанолом. Дайте постоять две минуты.
3. Наклоните предметное стекло и слейте метанол.
   • Прикоснитесь краем предметного стекла к бумажному полотенцу, чтобы удалить лишний метанол.
4. Перед окрашиванием отложите предметное стекло для просушки на воздухе.

---

Простое окрашивание

Простое окрашивание

Простое окрашивание — это просто: добавьте один краситель на фиксированное предметное стекло, дайте ему впитаться, смойте, дайте ему высохнуть и посмотрите. Это быстрая процедура для определения наличия и морфологии бактерий в клинических образцах, таких как стул и выделения.

Метиленовый синий используется для определения морфологии веретенообразных и спирохет при инфекциях полости рта. Это также краситель выбора для идентификации метахроматических гранул в Коринебактерии дифтерии . Гранулы будут окрашиваться в более глубокий синий цвет, чем окружающие синие бактерии. Другие виды Corynebacterium не имеют метахроматических гранул. Подойдут любые основные красители, такие как метиленовый синий, кристаллический фиолетовый, малахитовый зеленый или сафранин.

Основные (катионные или положительно заряженные) красители связываются с отрицательно заряженными компонентами клеточной мембраны и цитоплазмы.

Материалы

• Метиленовый синий
• Сафранин
• Кристально-фиолетовый
• Малахитовый зеленый
• Стойки для окрашивания
• Микроящики для инструментов
• Готовые предметные стекла

Общие положения

Окрашивание — это и искусство, и наука. Не существует жестких и быстрых правил для окрашивания и времени полоскания. Перечисленное время является рекомендациями, которые обычно работают хорошо. Вам нужно будет поэкспериментировать с тем, что работает с имеющимися у вас бактериями, и с методами, которые вы используете.

Очень важно, чтобы вы точно записывали, что вы делаете, и результаты, которые вы наблюдаете, в лабораторном журнале. Вы будете повторять эти окрашивания позже в семестре, и вы не хотите тратить свое время на повторное изобретение вашей успешной процедуры окрашивания. Было бы полезно, если бы каждый сотрудник лабораторного стола выбрал разные пятна, чтобы вы могли видеть, как они все выглядят.

Простая процедура окрашивания

1. Поместите тщательно подготовленные фиксированные предметные стекла на подставку для окрашивания над раковиной.
   • Делайте слайды по одному.
   • Покройте мазок любым доступным вам основным красителем.
   • Вам нужно ровно столько красителя, чтобы покрыть мазок. Пятно не должно капать с предметного стекла.
2. Оставьте пятно на 1-5 минут.
3. Используя прищепку, возьмитесь за длинный конец горки, наклоните горку над раковиной и смойте пятно струей воды из промывочной бутылки.
   
   • Обязательно распыляйте поверх мазка и дайте капле стечь.
   • Если вы распыляете непосредственно на мазок, вы можете смыть мазок с предметного стекла.
   • Промывать, пока вода не станет прозрачной или слегка окрашенной.
4. Прикоснитесь краем предметного стекла к бумажному полотенцу, чтобы удалить лишнюю воду. Теперь вы можете дать ему высохнуть на воздухе. В качестве альтернативы вы можете высушить его промокательной бумагой, поместив ее в книгу для промокательной бумаги и слегка нажав. Хотя этот метод быстрее, вы также можете промокнуть плохо прилипший мазок.
5. Просмотрите предметное стекло в иммерсионном масле и запишите свои наблюдения в журнал лабораторных работ.
6. Выбросьте использованные окрашенные предметные стекла в ведро с дезинфицирующим средством в раковине.

---

Негативное окрашивание

Негативное окрашивание

Негативное окрашивание еще проще, чем простые окрашивания, поскольку вам не нужно делать мазок. Каплю клеток наносят на предметное стекло и просматривают без фиксации. Пятно представляет собой взвесь углерода, обнаруженного в туши или нигрозине. Частицы углерода заряжены отрицательно, как и клеточная мембрана. Фон выглядит черным или окрашенным в цвет сепия, а клетки остаются прозрачными, так как они отталкивают краситель.

Некоторые положительно заряженные включения, такие как сера, могут окрашиваться. Это окрашивание дает точную информацию о морфологии клеток и наличии капсулы, поскольку клетки не фиксируются. Размер клеток кажется немного больше, потому что любые внеклеточные покрытия или выделения снаружи клеточной мембраны также не окрашиваются. Отрицательное окрашивание полезно для быстрого определения присутствия Cryptococcus neoformans , возбудителя криптококкоза, в спинномозговой жидкости. Этот метод также используется при окрашивании эндоспор и капсул.

Материалы

• Краситель нигрозин
• Ассорти культур

Общие положения

Как и при приготовлении мазка, вам потребуется лишь небольшое количество микроорганизма. Если у вас слишком много организмов, вы не сможете увидеть морфологию отдельных клеток. Также важно не использовать слишком много нигрозина. Если он слишком толстый, фон будет иметь потрескавшийся вид, похожий на лужи грязи, высыхающие на солнце. Вы хотите получить светлую пленку. Ваш инструктор продемонстрирует вам эту технику.

Процедура негативного окрашивания

1. Промаркируйте предметное стекло. Если вы работаете с бульонной культурой, поместите петлю, полную организмов, примерно на три четверти пути с левой стороны предметного стекла. Если вы работаете с чашечной культурой, добавьте каплю стерильной воды на предметное стекло и разведите свой микроорганизм в капле, не размазывая каплю.
2. Нанесите одну или две капли нигрозина на другое предметное стекло. Используйте свою стерилизованную петлю, чтобы взять петлю, полную нигрозина. Аккуратно смешайте его с каплей клеток, не слишком сильно размазывая каплю.

3. Держите правый конец слайда в правой руке; левой рукой сделайте еще один слайд под углом 45° или меньше к первому слайду, сразу за каплей нигрозина/клеток.
4. Скользите наклонным предметным стеклом назад по поверхности первого предметного стекла до тех пор, пока оно не коснется капли нигрозина и клеток. Подождите, пока капиллярное действие не потянет жидкость вдоль передней кромки наклонного предметного стекла.
5. Протолкните угловой слайд по поверхности плоского слайда. Большая часть нигрозина должна оставаться на исходном месте. Выбросьте предметное стекло в ведро с дезинфицирующим средством.
6. Отложите окрашенное предметное стекло, чтобы оно высохло на воздухе, прежде чем исследовать его в иммерсионном масле. Не забудьте начать изучение вашего слайда в области с самым бледным серым фоном.
7. Запишите свои наблюдения в журнал лабораторных работ.
8. Выбросьте использованное окрашенное предметное стекло в ведро с дезинфицирующим средством.

Особое примечание

Нигрозин очень легко снимается с предметного стекла и попадает на иммерсионный объектив. Обязательно тщательно очистите масляную линзу, когда закончите. Затем снова очистите. Как только он высохнет на линзе, его будет очень трудно удалить, и это ухудшит вашу способность (и других микро-студентов, использующих этот прицел) четко видеть вне линзы.

---

Окраска по Граму (отрицательная)

Окраска по Граму

Окраска по Граму является наиболее распространенным дифференциальным окрашиванием, используемым в микробиологии. Дифференциальные пятна используют более одного красителя. Уникальные клеточные компоненты бактерий определяют, как они будут реагировать на различные красители. Процедура окрашивания по Граму практически не изменилась с тех пор, как она была впервые разработана в 1884 году. Почти все бактерии можно разделить на две группы: грамотрицательные и грамположительные. Некоторые бактерии грамвариабельны. Trichomonas , Strongyloides , некоторые грибы и некоторые цисты простейших также имеют реакцию Грама. Очень мелкие бактерии или бактерии без клеточной стенки, такие как Treponema , Mycoplasma , Chlamydia или Rickettsia , не имеют реакции грамма. Характеристика любых новых бактерий должна включать их реакцию Грама.

Обычно дифференциальное окрашивание состоит из четырех компонентов; первичное пятно, протрава, фиксирующая пятно, обесцвечивающий агент для удаления основного пятна и встречное пятно. При окраске по Граму основной окраской является кристаллический фиолетовый. Это придает клетке интенсивный фиолетовый цвет. Морилка, йод, образует комплекс с кристаллическим фиолетовым внутри клеточной стенки. Затем клетку промывают либо обесцвечивателем Грама, либо 95% этанол. Грамположительные клетки сохранят красящий комплекс и останутся фиолетовыми. Краситель вымывается из грамотрицательных клеток. Встречный краситель, сафранин, используется для окрашивания клеток, которые потеряли первичное окрашивание, иначе они остались бы бесцветными, и вы не смогли бы их увидеть.

Большой комплекс йод-кристаллический фиолетовый сохраняется в клеточных стенках грамположительных клеток из-за молекулярной структуры многих слоев пептидогликана в клеточной стенке. Существует много сшитых тейхоевых кислот, и комплекс йода с красителем физически не может выйти наружу. В мембране также меньше липидов, и обесцвечивающий агент также не может добраться до нее. Грамотрицательные клетки имеют внешнюю мембрану и только один слой пептидогликана с большим количеством липидов. Краситель кристаллический фиолетовый легко вымывается.

Общие положения

Точность окрашивания по Граму зависит от целостности клеточной стенки бактерий. Есть множество вещей, которые могут влиять на целостность клеточной стенки; старые клетки (т. е. культуры старше 24 часов), образец получен от кого-то, кто лечился антибиотиками, нацеленными на эту клеточную стенку, такими как пенициллин, с клетками грубо обращались или вы их исправили при нагревании. В этих условиях грамположительные клетки становятся грамотрицательными. Если обесцвечивать слишком долго, грамположительные клетки будут выглядеть как грамотрицательные. И наоборот, если вы недостаточно обесцвечиваете, грамотрицательные клетки будут выглядеть как грамположительные. Единственный способ, которым вы можете доверять своим результатам, — это всегда запускать известные грамположительные и известные грамотрицательные образцы на одном и том же предметном стекле. Если они окрашиваются, как предсказано, вы можете быть уверены, что результат вашего неизвестного образца надежен.

Для правильного окрашивания по Граму требуется практика. Не рассчитывайте получить хорошее окрашивание по Граму с первой попытки. Рекомендуется придерживать предметное стекло прищепкой; ваши перчатки станут довольно психоделическими, как и все, к чему вы прикоснетесь!

Процедура окрашивания по Граму

1. Промаркируйте предметное стекло. Подготовьте свои мазки на предметном стекле с отрицательным граммом слева, вашим неизвестным в середине и положительным граммом справа.
   
   • Не забудьте смазать слайд метанолом!
2. Положив предметное стекло на штатив для окрашивания, покройте мазки кристаллическим фиолетовым на 1 минуту.
   
   • Используйте столько красителя, чтобы полностью покрыть мазок, но не настолько, чтобы он стекал или капал с предметного стекла.
3. Наклоните предметное стекло, вылейте кристаллический фиолетовый и быстро промойте водой из промывочной бутылки.
   
   • Не распыляйте непосредственно на мазки, иначе они смоются.
4. Залейте предметное стекло йодной протравой на 1 минуту.
5. Наклоните предметное стекло, слейте излишки йода и аккуратно обесцвечивайте с помощью обесцвечивателя Грама, пока он не станет прозрачным.
   
   • Это сложная часть!
6. Наклоните предметное стекло на несколько бумажных полотенец, чтобы удалить излишки обесцвечивающего средства.
7. Залейте предметное стекло сафранином на 1 минуту.
8. Наклоните предметное стекло, чтобы слить излишки сафранина, и осторожно промойте водой, пока она не станет прозрачной.
9. Дать предметному стеклу высохнуть на воздухе
10. Наблюдать при погружении в масло.
    • Грамположительный контроль должен быть фиолетовым, а Грамотрицательный контроль должен быть розовым.
11. Выбросьте использованный слайд в ведро с дезинфицирующим средством.

---

Капсульная окраска (Klebsiella)

Капсульная окраска Конго Красная

Капсульная окраска Конго Красная является модификацией отрицательного окрашивания на нигрозин, которое вы, возможно, делали ранее. Бактерии поглощают краситель конго красный, а затем фон окрашивают кислым красителем фуксином. Капсула или слои слизи, сильно гидратированные полимеры, исключают оба красителя. Фон будет синим, бактериальные клетки — розовыми, а прозрачные ореолы — это капсулы.

Клинически капсулы некоторых высокопатогенных бактерий (например, пневмококков, Haemophilis influenzae и менингококков) можно отличить с помощью антисывороток, специфичных для этого типа капсул. Бактерии суспендируют в антисыворотке, а затем смешивают с метиленовым синим. В процедуре окрашивания антисывороткой бактерии будут казаться синими, окруженными прозрачным ореолом, а затем окруженными тонкой синей линией в том месте, где антисыворотка прикрепилась к капсуле.

Материалы

• Конго красный краситель
• Кислотный краситель фуксина
• Кислый спирт
• Klebsiella pneumoniae культура
• Enterobacter aerogenes культура

Конго Красный Капсула Окрашивание Процедура

1. Поместите полную петлю Конго Красный на предметное стекло
2. Смешайте небольшое количество вашего организма с каплей конго красного.
   
   • Хорошо распределите суспензию организма/красителя на предметном стекле
3. Дайте предметному стеклу полностью высохнуть на воздухе.
   
   • Метанол не исправить!
4. Закрепите высохшее предметное стекло кислым спиртом на 15 секунд.
5. Промойте дистиллированной водой и покройте предметное стекло кислотным фуксином на 1-5 минут.
6. Промойте водой и дайте высохнуть на воздухе.
7. Осмотрите предметное стекло под масляной иммерсией.
   
   • Клетки окрашиваются в красный/розовый цвет, а капсулы выглядят как бесцветные ореолы на темно-синем фоне.

---

Окраска эндоспор Вирца

Образование эндоспор характерно для Clostridum и Bacillus spp. Способность концентрироваться и покрывать свою протоплазму позволяет им выживать в неблагоприятных условиях окружающей среды, с которыми они сталкиваются в своей почвенной среде обитания. Это также позволяет спорам противостоять окрашиванию. «Живые» организмы легко визуализируются с помощью простых окрасок и окрасок по Граму.

Эндоспоры обычно обладают высокой преломляющей способностью, падающий на них свет отклоняется. много видов Bacillus имеют тельца включения с высокой преломляющей способностью. Эти тельца включения могут выглядеть как эндоспоры при обычном окрашивании. Присутствие эндоспор должно быть подтверждено окрашиванием, специфичным для эндоспор. Наличие, характерная форма и положение эндоспор требуют специальных процедур для проникновения через оболочку эндоспор. Большинство окрашиваний эндоспор включают нагревание предметных стекол, при этом они постоянно остаются влажными красителем. Хотя он быстрее, он производит летучие химические вещества и представляет собой просто большой беспорядок. Те же результаты можно получить, оставив краситель на предметном стекле на 30 минут. Рекомендуется сначала начать с этого слайда и работать над другим пятном, пока вы ждете, пока краситель проникнет в эндоспору.

Общие соображения

Вы будете использовать видов Bacillus для окрашивания эндоспор. Форма и положение спор B. cereus очень похожи на споры B. anthracis . Bacillus не начинает образовывать споры, пока не закончится пища. Если культуры слишком молодые, вы в основном увидите только розовые палочки бактерий. Если культуры слишком старые, вы в основном увидите только маленькие зеленые овалы эндоспор. В идеале вы должны увидеть зеленые овальные тела эндоспор, окруженные розовой вегетативной бактериальной клеткой. Для достижения наилучших результатов выберите образец из середины колонии с помощью прямой иглы для посева. Край колонии все еще активно растет и будет иметь мало эндоспор.

Материалы

• Малахитовый зеленый краситель (5%)
• Сафранин (0,25%) — встречная окраска
• Bacillus spp. пластина

Процедура окрашивания эндоспор Вирца

1. Сделайте мазок на Bacillus и метаноловый фиксаж.